描述
新品!比原有PowerClean® DNA Clean-Up Kit快一倍。
PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit使用了专利抑制因子去除技术(IRT)为科研工作者提供创新手段纯化粗提基因组DNA。与原有的PowerClean® DNA Clean-Up Kit相比极大优化纯化过程,更少的操作步骤,前后只需7min。无色透明的DNA样品可能也会含有PCR抑制因子,而呈现琥珀色到棕色,含有大量腐植酸和多酚等PCR抑制因子的粗提DNA也能通过本试剂盒纯化。PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit能去除这种棕黑色以及腐植酸、亚铁血红素、多糖、多酚、富哩酸、脂质、染料等PCR抑制因子。获得的高纯度DNA可直接用于PCR、qPCR和第二代测序等要求苛刻的下游应用。本试剂盒已通过各种问题土壤粗提DNA和掺入商品化腐植酸检验。甚至对各种来源DNA样品都表现良好。
存档DNA或粗提DNA样品与我们的专利DNA Clean-Up试剂盒混匀,抑制因子被选择性地从DNA溶液中去除。所有DNA被离心柱的硅胶滤膜吸附,然后被洗脱下来。DNA的回收率会因影响DNA浓度检测的抑制因子含量不同而有差异。最终DNA可直接用于PCR分析或其它下游应用。建议使用Picogreen法或电泳定量检测DNA回收率。
研究与深入
A.
[起始] |
[PowerClean® Pro] |
[Zymo OneStep™] |
B.
样品 |
起始样品 |
PowerClean® Pro DNA |
Zymo OneStep™ |
ng/μl |
311.27 |
76.85 |
143.24 |
260/280 |
1.36 |
1.95 |
1.55 |
260/230 |
0.84 |
2.04 |
1.18 |
C.
|
[起始] |
[PowerClean® Pro] |
[Zymo OneStep™] |
图1。 去除DNA中的腐殖质。分别用PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit或Zymo Research OneStep™ PCR Inhibitor Removal Kit纯化过的样品,用1.2% TAE凝胶电泳检查结果。除了纯化方法外,所有样品的浓度、质量和DNA分子量都一样。使用的是NanoDrop 1000分光光度计定量检测DNA(B)。从数据可观察到起始样品浓度很高,但260/280及260/230比值都较低,表明腐殖质之类的杂质在A230有较高吸光值。经过PowerClean® Pro DNA Kit纯化过后,260/280及260/230比值上升至与纯DNA样品持平,DNA浓度降到平均76.85ng/μl(定量检测数字由Qubit Picogreen分析法所得,数据为列出)。经过OneStep™ Kit纯化的样品,260/280及260/230比值仍旧偏低,表明抑制因子依然存在。腐殖质的存在使得起始样品呈现棕黑色(C)。经过PowerClean® Pro DNA Clean-Up Kit的纯化,样品变干净了。然而,经过OneStep™ Kit处理的样品仍带棕色,表明未能去除所有抑制因子。
图2。成功进行qPCR扩增。 图1中描述的DNA通过杆菌16s法qPCR(使用两种不同方法纯化的1μl DNA原液或10倍稀释液)。经过PowerClean® Pro DNA Kit纯化的DNA成功扩增,DNA原液和10倍稀释液之间约差3个循环,表明DNA不再含有抑制因子。而经过Zymo OneStep™ Kit处理的样品仍无法扩增,10倍稀释液的Cq值要大于PowerClean® Pro的,表明样品中仍有抑制因子。