珠磨研磨法均质样品提取RNA

提取样品核酸的一种高效方法是，把样品与坚硬的表面快速地碰撞，直至细胞壁、细胞膜崩解，释放出胞内容物。这里说的是：珠磨研磨法。

珠磨研磨法能快速裂解细胞供DNA或RNA提取，相对酶法的长时间孵育以及专一性、成功率不高，好太多。酶法尚且需要先把基质破碎才能提高消化效率。对于娇嫩的RNA，长时间的消化，耗不起。

说到这里，就不可避免地提出这样的问题，我的样品该用什么样的研磨珠，需要多大的研磨强度？问题涉及到非常多变量，所以为了避免你想这个问题挠破头皮，接下来两篇文章将向你提供MOBIO实验室长期工作总结出来的一些行之有效的方法。

本篇围绕动物组织和植物样品。

最古老的RNA提取法-液氮

提取动物组织RNA需要彻底研磨。以前，最常用的方法是用液氮冷冻样品，然后用研钵乳钵槌把组织样品碾成粉末。看上去挺好，却存在研磨不充分的弊端。当样品被粉碎并重悬于高离序液裂解缓冲液，大分子基因组DNA增加了溶液的粘稠度可能会堵塞堵塞离心柱。为了克服这个问题，下一步要用注射器和针头剪切基因组DNA以提高离心柱上去除基因组DNA的效率。

液氮法与手持搅拌机的缺点

现在都2012年了，液氮/研钵乳钵槌这样的老方法早已过时。这套方法，需要你要么弄好一个样清理一下工具，要么准备大量研钵乳钵槌应付大量的样品。手持搅拌机也一样。虽然能快速充分粉碎样品，尽可能减少RNA的降解，但每用完一次需要清洁一下探针，避免样品交叉污染。如果你备了一次性的探头，手持搅拌机也不失为一个好方法。缺点是，你一次只能处理一个样品。

强力珠磨研磨-高通量提取，杜绝样品之间交叉污染

于是，强力珠磨研磨设备出场了，大大提升批量处理能力。MOBIO根据大量客户的反馈以及长期研发过程的积累的想法，开发出一个仪器叫PowerLyzer™ bench top homogenizer，作为珠磨研磨机它拥有了我们想要的所有功能。它工作时非常安静，甚至不会引起桌面震动。研磨管的水平放置方式大大提高研磨效率，缩短了研磨时间减少发热量也减轻对核酸的损伤。更短的研磨时间带来更好的RNA完整性。

我们用了哪种研磨珠？

提取动植物组织我们使用了2.8mm的陶瓷研磨珠套管有两个原因。第一，2.8mm直径的研磨珠非常适合一次10-20mg片块的动物组织或50mg的植物组织。我们测试过1.4mm直径的研磨珠，短时快速的研磨效果没有大研磨珠好。长时间研磨会液化样品增加RNA降解。 使用单一品种研磨珠（相对于研磨珠混搭），样品之间获得的研磨效果均一性更好。大直径高效的研磨珠能直接与组织接触，不会被小直径低效的研磨组合阻碍。采用2.8mm陶瓷研磨珠的第二大原因是，预灌研磨珠的管子采用的是特制塑料，能抵受得住高强度珠磨撞击不会破裂。

选择最合适的研磨速度和循环

不同的设备使用的研磨速度和循环都不一样。我们测试了3500~5000RPM范围内提取动物组织，其中最合适的研磨方案是3500RPM速度2个45s循环，中间休停30s。这个速度相当于FastPrep的5.5档。PowerLyzer比FastPrep更方便的一点是，它可以储存任意循环次数和循环间的休停时间。你可以把最合适的研磨方案保存起来留下次用。

我们发现，提取植物RNA的最优研磨方案是4200RPM转速2个45s循环，中间休停30s。对比3500、4200、5000TPM不同转速，发现提取包括叶片、茎、根部和种子等各种类型样本，4200RPM能获得最高得率。

最后

强力高速珠磨研磨机法比一次只处理一个样本的研磨方法更有优势。对于换用此方法的人可能觉得需要重新摸索条件非常麻烦。幸好，我们已经为你想好了。大量的研究数据已经总结出一套最完善的研磨方案，你能一次性大量处理样品而且获得最高的RNA得率，最好的核酸分子完整性，再也不用冰浴样品一个一个来了。

若果你对采用PowerLyzer™ 专用试剂盒或经验证适合大型强力珠磨研磨机使用的研磨珠套管，不妨猛点下面链接获取更多信息。

提取组织RNA：PowerLyzer UltraClean Tissue & Cells RNA Isolation Kit

提取植物RNA：PowerLyzer UltraClean Plant RNA Isolation Kit PowerPlant

DNA提取试剂盒采用的就是2.38mm不锈钢研磨珠，可直接在强力珠磨研磨机上使用。