磁珠法血液DNA/RNA的高通量提取

两个吸血鬼走进酒吧并叫来酒保

"给我来杯血"，一个吸血鬼说。

"给我来杯血浆"，另一个吸血鬼说。

"好的"酒保回答，"一杯血和一杯软血（Blood lite）！"

(此处应该有笑声)

是的，我们在庆祝一个恐怖的季节，同时，也在此发布我们的新产品PowerMag Blood DNA/RNA Isolation kit。

血液：里面有什么？

血液中含有血浆、红细胞、白细胞和血小板，它是非常独特的一种样品，因为血液中的核酸非常丰富，这座基因金矿被掩埋在各种的细胞碎片和蛋白混合物中，这些污染物会影响下游的PCR反应或测序，尤其是红细胞里的血红蛋白，它是影响DNA/RNA纯度和抑制PCR反应的主要元凶。

血液的采集和保存

应该用抗凝管采集血液，否则血液凝集并把携带DNA/RNA的细胞都包埋起来。。常见准的血液采集管会使用EDTA或柠檬酸盐抗凝。这两种物质都不会干扰下游的基因分析。肝素也能抗凝，但它容易吸附DNA，所以不推荐。

如果不能马上处理，用于DNA提取的全血可以在4度最长保存2个星期，用于RNA提取的最长不超过2个小时。如果需要保存更长时间，则要做一些特殊处理了。如果只需要DNA，你可以将血液分装成小份(250-500 μL)置于-20oC 或-80oC 长时间保存。 若要提取血液中的RNA，就需要当心了。RNA酶是一种很顽强的酶，即便在冷冻状态下仍能发挥作用，如果不能马上处理样本，我们建议将血样置于到RNA稳定液中，比如PAXgene™血液RNA管。在这些管子里头，胞RNA在18°C到25°C可稳定保存3天，2°C到8°C可保存5天。

另一方面，如果RNA中途要暂停，可把分离、裂解、冻存步骤沉淀的白细胞置于RNA酶抑制缓冲液中。例如，沉淀的白细胞可以置于PowerMag® Blood DNA/RNA Isolation kit所带的PowerMag® 白细胞裂解液中，-20oC 或 -80oC保存，当你做好提取准备时，将样品取出放在室温，照接下来的步骤操作即可。

从血液中获得DNA或RNA

在PowerMag Blood DNA/RNA Isolation kit 中，利用了哺乳动物血液中，基因组DNA(gDNA)只存在于白细胞中，红细胞和血小板中没有核酸所以不含gDNA（禽类红细胞例外）的特性，红细胞或白细胞靠缓冲液来裂解。一般来讲，1ml人血中白细胞的平均数大概7，000，000个。

操作的第一步是用低渗缓冲液选择性的裂解红细胞。然后沉淀白细胞，去除上清中含有亚铁血红素的红细胞。。往白细胞沉淀中加入裂解缓冲液以释放核酸，像上面说到的，如果要提取RNA而又不能立马处理，此处是可以将其放在(-20℃ 或-80 ℃)长期保存的时机，接下来使用ClearMag® 磁珠特异性捕获核酸，去除杂质，再洗涤核酸，最后洗脱的核酸可直接用于下游反应。

RNA和DNA的平均得率？

没有两个血液样本是一样的。白细胞数量的不同会影响到提取的核酸的量，而白细胞数量会受采样时宿主的健康状况影响。不同种属动物血液的核酸提取得率也不一样。然而，每200ml MO BIO员工全血的DNA和RNA平均提取得率分别是3mg和1mg。

高分子量的核酸

如果你要用高通量的方法从血液中提取高分子量的核酸，这款试剂盒再合适不过了！我们已经用这款试剂盒提取到了高达100kb的DNA片段，如果你在寻找那些含量不高但片段很长的靶DNA以用于测序，使用这款血液试剂盒吧！

说了这么多，实在饿了，我最好回到餐桌那去，我的水和大蒜们都在等我呢，万圣节后见！

参考文献：

1. Yokota M, Tatsumi N, Nathalang O, Yamada T, Tsuda I. (1999). "Effects of Heparin on Polymerase Chain Reaction for Blood White Cells". J. Clin. Lab. Anal. 13: 133–140.

2. DNA isolation by a rapid method from human blood samples: effects of MgCl2, EDTA, storage time, and temperature on DNA yield and quality. Lahiri DK1, Schnabel B. Biochem Genet. 1993 Aug;31(7-8):321-8.